获得功能性治愈的肝内HBsAg阳性患者中
整合HBV DNA及
cccDNA仍然保留转录活性
2019年，全球慢性乙型肝炎(CHB)患者约有2.96亿人，并导致约82万人死亡，而中国有近8600万名慢性乙型肝炎患者。目前，慢乙肝患者经过规范的抗病毒治疗达到病毒学抑制后，仍有超过20%的患者可能会出现乙型肝炎病毒复发，然而复发的机制尚不完全清楚。有学者研究认为病毒学复发与高水平的肝内共价闭合环DNA (cccDNA)相关，但消除肝内cccDNA和HBV整合被认为是一个概念性的终点，很难实现。
目前的治疗方法更有可能实现cccDNA的转录沉默和HBV的整合。到目前为止，还没有研究报道肝内HBV的转录是否在通过聚乙二醇干扰素(PEG-IFN)治疗获得功能性治愈的患者中完全沉默。有研究表明：PEG-IFN诱导的血清HBsAg已清除的患者中，肝内HBsAg仍然呈阳性，提示在这些患者中肝内HBV RNA仍在转录，但尚不清楚它是来自cccDNA还是整合HBV DNA。综上所述，进一步探索cccDNA的微量转录行为和功能性HBV整合将有助于确定接受干扰素治疗的功能性治愈患者肝内残留HBsAg的来源。
为了攻克上述难题，中山大学附属第三医院研究团队进行了HBV捕获测序、深度RNA测序和肝组织中肝内HBV标记物检测 （HBV RNA定量检测与HBV cccDNA定量检测），以全面研究PEG-IFN治疗后功能性治愈患者整合HBV DNA和cccDNA的转录活性。
中山大学附属第三医院研究团队在2013年至2021年间，入组47名已经获得功能性治愈的患者、21名未获得功能性治愈的患者及14名HBeAg阴性的初治患者。功能性治愈的标准为：血清HBsAg<0.05 IU/mL，血清HBV DNA水平<20 IU/mL，血清HBV前基因组RNA (pgRNA)低于检测下限。
1.1 四分之一的功能性治愈患者肝内仍存在HBsAg
功能性治愈患者肝内cccDNA水平和HBsAg阳性肝细胞比例显著低于未治愈和初治HBeAg阴性患者（下图A，图B）。此外，25.5%的功能性治愈患者中存在HBsAg阳性肝细胞，高达72.2%的功能性治愈患者在肝组织样本中的可检出HBV RNA 。表明基于PEG- IFN治疗后的功能性治愈并不能导致肝内HBsAg被完全清除，肝内HBV RNA仍在转录。
（图A.治愈组、非治愈组与初治组的cccDNA含量；图B.治愈组、非治愈组与初治组的HBsAg阳性肝细胞比例）
1.2 肝内HBsAg阳性的功能性治愈患者HBV RNA转录水平较高
相对于未治愈组，治愈组肝内HBV RNA水平较低（下图4B，p=0.004），而肝内HBsAg阳性的功能性治愈患者HBV RNA水平（下图E，p=0.013）与总HBV RNA计数（下图F，p=0.002）均高于肝内HBsAg阴性的功能性治愈患者。
（图B.获得及未获得功能性治愈患者肝内HBV RNA含量；图E.HBsAg阳性及阴性患者肝内HBV RNA含量; 图F. HBsAg阳性及阴性患者肝内总HBV RNA计数）
1.3 肝内HBsAg阳性的功能性治愈患者的cccDNA和整合HBV仍具转录活性
经RNA-seq分析，发现部分肝内HBsAg阳性的功能性治愈患者仍有微量的cccDNA转录，但肝内HBV RNA主要来源于整合HBV DNA。
1.4 整合HBV和cccDNA具转录活性的功能性治愈患者存在病毒学复发的风险
4例存在微量的cccDNA转录活性的肝内且HBsAg阳性的功能性治愈患者中，有2例出现HBV复发（下图A）。而另外有2名肝内HBsAg阳性但没有cccDNA微量转录活性的功能性治愈患者，在至少108周的随访期间未发生HBV复发(下图B)。因此，在基于PEG-IFN的治疗后实现功能性治愈但肝内HBsAg和cccDNA的仍有微量转录活性的患者可能有潜在的病毒学复发风险。
（图A. 存在HBV整合转录活性和cccDNA微量转录活性的功能性治愈患者的随访；图B.仅有HBV整合转录活性的功能性治愈患者的随访）
本篇研究文章获得国家重点研发计划项目、国家艾滋病和病毒性肝炎防治重大科技专项、广州市科技计划重点项目等多项国家级与省级重大项目支持。
海力特生物利用其先进的微量精准核酸检测技术，为中山大学附属第三医院的高志良教授研究团队提供了高灵敏度的 HBV RNA定量检测以及HBV cccDNA定量检测技术支持。HBV RNA作为能够反应HBV cccDNA储存库活性的新型无创性标志物，该标志物的检测目前已被2022年最新的慢性乙肝防治指南推荐应用。
而高灵敏度HBV RNA定量检测也能够更好地进行疗效评估及监测病毒库的转录活性情况。在科研和临床上也能够更好地筛选出具良好预后的患者，为慢性乙型肝炎患者实现功能性治愈创造更多可能性。
文献引用：
广州海力特生物科技有限公司成立于2010年，是聚焦于重大传染病的新一代核酸定量检测产品和技术的领军者。
公司拥有先进的 SUPBIO® 微量精准核酸检测专利技术，专注于各项重大传染病（艾滋病、病毒性肝炎、结核等）及肿瘤的极早诊断和治疗评估的新型核酸检测试剂研发生产、销售、科学检测及医学检验服务。公司产品与技术均具有超微量、高精准、测病根等独特优势，为临床医学提供精准监测，帮助患者直达疾病治愈。
